Ejemplo de ADN Recombinante en la naturaleza
Se introduzca el DNA clonado en la célula huésped (en este caso Escherichia coli). En bacterias, el proceso de introducir DNA purificado dentro de una célula se llama transformación. Para Escherichia coli, uno de los métodos de transformación requiere que las células sean tratadas con CaCl2 en frío, seguido de una breve exposición (c.a. 90'') a alta temperatura (42°C). Pero la transformación es un proceso poco eficiente ya que normalmente se transforma una célula de mil y de éstas células transformadas pueden haberlo sido por el plásmido recircularizado que ha escapado a la defosforilación por fosfatasa alcalina, otras adquieren DNA no plasmídico y unas pocas son transformadas por la construcción del plásmido-DNA insertado.
Para asegurarnos que esta construcción se va a perpetuar en su forma original, las células huésped de Escherichia coli usadas no deben poseer los genes que codifican para los enzimas de restricción y así evitar que la construcción incorporada sea degradada por estos enzimas. Además estas células no deben ser capaces de llevar a cabo intercambios de moléculas de DNA (RecA-) y así evitar que el DNA insertado no sea alterado debido a la recombinación homóloga que pudiera ocurrir.
Para asegurarnos que esta construcción se va a perpetuar en su forma original, las células huésped de Escherichia coli usadas no deben poseer los genes que codifican para los enzimas de restricción y así evitar que la construcción incorporada sea degradada por estos enzimas. Además estas células no deben ser capaces de llevar a cabo intercambios de moléculas de DNA (RecA-) y así evitar que el DNA insertado no sea alterado debido a la recombinación homóloga que pudiera ocurrir.
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